1、血液的稀释倍数:取红血球管(管腔内有红色玻璃珠的),吸血液到刻度“1”处,再吸稀释液到刻度“101”处,血液稀释100倍,若吸血液到刻度“0.5”处,再吸稀释液到“101”处,则血液就稀释200倍。
2、数的方法
① 先用低倍镜找到中间计数池地位,并观察红血球分布是否
平均,再用高倍镜计数。
② 中间计数池划分25个中心方格,是作红血球计数之用,一
般比四角四个中小格,加上中间的一个中小格,共5个中
小格地位内红血球数全等,等于80个小格,等于1/50立方
毫米,数的方法,可依照白血球计数的方法。
3、数目的计算
公式:A×B×50=红血球/立方毫米
A-80个小格内数得的红血球数。
B-血液稀释倍数。
50-缺数部分(我们要知道一立方毫米没有稀释过的血液的红血球是多少,而实际计数得红血球数是等于1/50立方毫米,80个小格内数得的红血球数乘50等于一立方毫米数)
白血球吸管的清洁:用好后的吸管,先吹去剩余血液,吸入蒸馏水先洗涤三次,再慢慢吸入95%乙醇,待水混淆混入乙醇内慢慢吹出乙醇。乙醇洗三次后,再以乙醚洗三次。吹时不可用嘴,嘴吹有大量潮湿气体,吸入管内,管不易干,洗后吸管要绝对干燥。
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.
计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
血球计数板的使用
以计数酵母菌为例
(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.
(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.
(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.
(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.
(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).
(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.